■ 产品简介:
EGY48 酵母菌可用单双杂实验,转化质粒进行互作验证或筛库试验。筛选标记为:his3,trp1,ura3 。EGY48-LacZ 酵母单杂系统需要 pB42AD 和 pLacZi 两种质粒配套使用。质粒 pB42AD 的筛选标记为 TRP1 ,用于表达AD(来自疱疹病毒的88个氨基酸残基组成的B42AD蛋白)与目标蛋白(Prey)的融合蛋白。质粒pLacZi的筛选标志为 URA3 ,报告基因为 LacZ ,只有当 Bait 和 Prey 互作时才能启动 LacZ 表达,在显色培养基上显蓝色,从而确定 DNA 和蛋白有相互。本方案结合 LacZ 基因胞外表达显色试剂盒进行互作验证,采用稀释点板的方法,与涂板的方法相比,更能直观的体现出 DNA 和蛋白的互作,还能减少培养基的使用。
■ 注意事项:
载体注意事项:
1. 建议收到质粒后请先转化感受态(克隆菌株),再挑选单菌落重新提取后使用。
2. 转化前请准确查找该质粒对应的抗生素、抗生素浓度、感受态(克隆菌株)和培养温度。
3. 如有必要请测序后使用,我司网站检索对应货号可下载质粒图谱。
培养基注意事项:
1. 一般情况下 pH 值不必调节,建议测定一下 pH5.8±0.2 即可。
2. SD 培养基可能溶解不彻底或灭菌后有少量沉淀,不影响实验进行。
3. SD 培养基灭菌后,颜色为白色至浅黄色。
感受态注意事项:
1. 一支感受态不建议分成两份使用。
2. 如果转化效率低,只有几个单克隆,建议做 PCR 鉴定。
3. 筛选出来的单克隆,一般是圆形凸起、边缘整齐、表面光滑湿润、不透明、乳白色-浅黄- 浅粉色的菌落,有酵母气味。
本试剂盒注意事项:
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。
2. 为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。